ATCC細胞在不加任何條件下直接凍存時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
ATCC細胞可能由于各種原因相互附著并發(fā)生結團。細胞結團的常見的原因是在細胞裂解之后，培養(yǎng)基中存在游離DNA和細胞碎片，DNA的粘性使細胞和其他碎片聚集成大的團塊。以下是細胞裂解和DNA被釋放到培養(yǎng)基中的一些原因：
1.消化過度：過度使用蛋白水解酶可能會導致細胞結團。
2.環(huán)境應力：機械力、反復凍融循環(huán)和其他環(huán)境應力可加速細胞死亡，早期現(xiàn)象可能是細胞和細胞粘附。
3.組織分解：通過化學、機械或酶法從初生組織制備單細胞懸浮液可能會導致一些細胞破裂。從組織制備單細胞懸浮液時，通常需要膠原酶消化細胞外基質。
4.過度生長：當細胞達到融合狀態(tài)時，細胞碎片和細胞裂解產(chǎn)生的游離DNA就會堆積過多。
那么我們該如何預防細胞結團呢？細胞結團會減少細胞對關鍵營養(yǎng)素的獲取，從而阻礙整體細胞的生長。細胞結團還會影響需要清潔制備單個細胞的下游檢測，根據(jù)結團的根本原因，下找出合理的解決方案：
1.細胞裂解與DNA釋放：DNaseⅠ可用于組織降解以及常規(guī)細胞培養(yǎng)過程中，以防止多種類型細胞的結團。
注意：DNaseⅠ在二價離子（如Mg2+，Ca2+）存在時活性大。
2.二價陽離子：檸檬酸鹽和EDTA等螯合劑可以用于去除細胞培養(yǎng)基中的鈣離子。也可使用無血清、無Ca2+/Mg2+平衡鹽溶液。
3.細胞密度：細胞在傳代前，參考細胞系文獻或者已知的特性來獲取推薦的細胞密度。
4.操作：在進行細胞分離時，應小心處理細胞并使用適當?shù)碾x心機設置。微小的結團可以通過攪碎，或者輕柔地上下吹打細胞來解決。
5.支原體污染：處理掉被污染的細胞，消毒培養(yǎng)室和細胞培養(yǎng)箱。遵循良好的實驗室規(guī)范以避免污染。
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